ELISA試劑盒在科研領(lǐng)域運(yùn)用尤為廣泛，它以其特異性強(qiáng)和靈敏度高的特色被我們所親睞，今日與我們說(shuō)說(shuō)ELISA試劑盒測(cè)定的過(guò)程。
ELISA試劑盒測(cè)定過(guò)程：
固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗刷+加酶標(biāo)物→溫育→洗刷→加底物→溫育一加中止液→比色→斷定效果。
ELISA試劑盒操作較冗繁,在操作中應(yīng)留心以下4個(gè)方面：
1.在成批手藝檢測(cè)中，還應(yīng)留心操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)刻的差異，使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時(shí)刻不一致，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法及定量檢測(cè)影響很大，不留心可能會(huì)導(dǎo)致過(guò)錯(cuò)效果或定量不準(zhǔn)。
2.洗刷是ELISA試劑盒操作過(guò)程中抉擇實(shí)驗(yàn)成敗的一個(gè)關(guān)鍵過(guò)程。目的是除去未結(jié)合的免疫反應(yīng)物，中止抗原抗體反應(yīng)，除去標(biāo)本中與反應(yīng)無(wú)關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反應(yīng)過(guò)程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。可用洗板機(jī)洗板或手藝洗板，前者洗刷質(zhì)量較好，各反應(yīng)孔洗刷作用均一，批內(nèi)、批間差異小，手藝洗板應(yīng)留心控制各孔洗刷作用，差異不宜太大。
3.跟著病情的發(fā)展或由其他要素影響，某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動(dòng)搖，因此有必要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。直接法測(cè)定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反應(yīng)。
4.加樣一般運(yùn)用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加中止液。加標(biāo)本時(shí)有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，避免穿插污染。加酶結(jié)合物、底物和中止液時(shí)則不需更換吸嘴。
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