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現貨人內源性素ELISA試劑盒說明書
更新時間:2014-02-03   點擊次數:1397次

檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預
先包被內源性素(AEA)抗體的包被微孔中,依次加入標本、標
準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,
TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終
的。人內源性素ELISA試劑盒顏色的深淺和樣品中的內源性素(AEA)呈正相關。用
酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞
刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地
分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘
取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于
-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1. 酶標儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
人內源性素ELISA試劑盒操作注意事項
1. 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的
濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解
后再使用。
2. 實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
3. 濃度為0 的S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經稀釋5 倍,zui終結果乘以5 才是樣本實際濃度。
4. 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5. 所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱96 孔配置48 孔配置備注
微孔酶標板12 孔×8 條12 孔×4 條無
標準品0.3mL*6 管0.3mL*6 管無
樣本稀釋液6mL 3mL 無
檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無
20×洗滌緩沖液25mL 15mL 按說明書進行稀釋
底物A 6mL 3mL 無
底物B 6mL 3mL 無
終止液6mL 3mL 無
封板膜2 張2 張無
說明書1 份1 份無
自封袋1 個1 個無
注:標準品(S0-S5)濃度依次為:0、6.25、12.5、25、50、100 pg/mL
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20 稀釋,即1 份的20×洗滌緩
沖液加19 份的蒸餾水。
洗板方法
1. 手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min 后甩盡
孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5 次。
2. 自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5 次。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封
袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不
加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶
(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴
鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去
洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5 次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B 各50μL,37℃避光孵育15min。7. 每孔加入終止液50μL,15min 內,在450nm 波長處測定各孔的
OD 值。
結果判斷
繪制標準曲線:在Excel 工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應
OD 值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣
本濃度值。
試劑盒性能
1. 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R 值,大于等于
0.9900。
2. 靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL。
3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性:板內、板間變異系數均小于15%。
5. 貯藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6 個月
免責聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,人內源性素ELISA試劑盒不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所
產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。
2. 嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者
承擔。

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Y118685 纖連蛋白(FN)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Fibronectin (FN) 96T Bos taurus; Bovine (Cattle)
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Y118687 干擾素α(IFNα)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Interferon Alpha (IFNa) 96T Homo sapiens (Human)
Y118688 凋亡相關因子配體(FASL)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Factor Related Apoptosis Ligand (FASL) 96T Mus musculus (Mouse)
Y118689 凋亡相關因子(FAS)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS) 96T Mus musculus (Mouse)
Y118690 凋亡相關因子(FAS)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Factor Related Apoptosis (FAS) 96T Homo sapiens (Human)
Y118691 E選擇素(SELE)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 96T Rattus norvegicus (Rat)
Y118692 E選擇素(SELE)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Selectin, Endothelium (SELE) 96T Mus musculus (Mouse)
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Y118695 紅細胞生成素(EPO)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Erythropoietin (EPO) 96T Homo sapiens (Human)
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Y118697 上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測試劑盒(化學發光免疫分析法) CLIA Kit for Cadherin, Epithelial (CDHE) 96T Homo sapiens (Human)

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